对于拯救实验细胞将重组人&明尼

阿波利斯明尼苏达州添加到完全培养基中作为化学引诱剂。培养室在°中孵育小时。孵育后用棉签除去上室中的细胞。将迁移的细胞固定并染色并通过光学显微镜进行计数。对来自五个随机区域的细胞进行计数。实验一式两份进行并进行三次。管形成测定将孔板涂有μ并在°下孵育分钟。将细胞×铺在包被的板上并在°下孵育小时。

为了间接影响管形成将细胞与来自克隆

和的条件培养基一起孵育。细胞转染小时后评估对管形成的新西兰电话号码列表直接影响并在完全培养基加中生长。对于救援实验将重组人&添加到孔中。实验一式三份进行并重复两次。使用倒置显微镜以倍放大倍率拍摄每孔张图像。对每个图像的节点数量定义为至少三个细胞形成一个点进行量化。为了考虑细胞聚集从每组中去除最高和最低值。体内基质胶塞测定用阴性对照或和的组合浓度均为转染细胞后将细胞暴露于无血清培养基中小时。然后我们收集上清液并离心以除去细胞。如前所述

我们将条件培养基与不含酚红的基质胶比例

总量混合。我们对三个治疗组的小鼠进行皮下注射每组只并以作为阳哥伦比亚电话号码列表性对照。天后我们杀死小鼠并提取基质胶塞以测定血红蛋白含量血红蛋白测定。检测根据制造商的方案使用免疫测定试剂盒&通过对人和蛋白水平进行定量。在六孔板中用或阴性对照或转染和细胞。